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Objectifs de ces notes
- comprendre les principes d'une séparation chromatographique
- connaître les paramètres principaux qui décrivent la séparation et l'efficacité de la séparation
- savoir de manière quantitative comment améliorer la résolution d'une séparation chromatographique
Introduction
- méthodes sont de plus en plus développées
- nombre d'applications est illimité
- environnemental
- biomédical
- pharmaceutique
On fait intervenir:
- une phase stationnaire (solide ou film imprégné sur un solide)
- une phase mobile (liquide, gaz, fluide supercritique)
Technique mise au point par le botaniste russe Tswett (1906) pour la séparation d'un mélange de pigments végétaux sur un support adsorbant de
carbonate de calcium
Technique reprise en 1941 (travaux de Martin et Synge)
Définitions
- élution : percolation d'un composé sur une colonne
- éluant : : solvant permettant d'éluer le composé
- éluat : solution nreceuillie au bas de la colonne.
- Chromatogramme : enregistrement par un détecteur des pics élués.
Types de chromatographie
On distingue les diverses chromatographies selon:
- le mécanisme de rétention
- Adsorption
- Partage
- Electrostatique
- Exclusion de taille
- Echange de ligands
- Affinité (biospécifique)
- le procédé opératoire
- la nature physique des phases
- la phase mobile
Notions de base
- Les séparations sont basées sur les différences de distribution de solutés entre deux phases non miscibles (l'une étant solide)
- Le coefficient de distribution (ou de partage) du soluté se définit comme le rapport de concentration entre la phase stationnaire et la phase mobile
CS = concentration du soluté dans la phase stationnaire
CM = concentration du soluté dans la phase mobile
Ce n'est pas un vrai équilibre puisque le renouvellement continu de la phase mobile
permet aux composés de se déplacer dans la colonne selon une vitesse différente en fonction de leur affinité pour les deux phases Le composé ayant le plus d'affinité pour
la phase mobile va migrer le plus rapidement
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